SARS-CoV-2 Kit Prawf Acid Niwcleig
SARS-CoV-2 Mae pecyn Prawf Asid Niwcleig yn berthnasol i ganfod asid niwcleig COVID-19 yn ansoddol mewn swabiau nasoffaryngeal, swabiau oroffaryngeal a sputum. Mae canlyniadau'r profion yn darparu sail diagnosis moleciwlaidd ar gyfer heintiau neu gleifion a amheuir, ac ni ddylid eu defnyddio fel yr unig faen prawf ar gyfer diagnosis clinigol.
Disgrifiad
Defnydd Bwriedig:
SARS-CoV-2 Mae pecyn Prawf Asid Niwcleig yn berthnasol i ganfod asid niwcleig COVID-19 yn ansoddol mewn swabiau nasoffaryngeal, swabiau oroffaryngeal a sputum. Mae canlyniadau'r profion yn darparu sail diagnosis moleciwlaidd ar gyfer heintiau neu gleifion a amheuir, ac ni ddylid eu defnyddio fel yr unig faen prawf ar gyfer diagnosis clinigol.
Defnyddiau:
Mesuryddion | Manylebau | Lliw'r caead | Cyfansoddiad |
Cymysgedd Ymateb COVID-19 | 1165μL tiwb ×1 | Brown | Buffer, dNTPs, Primers, Probes. |
Cymysgedd COVID-19Enzyme | Tiwb 85μL ×1 | Glas | Polymerase DNA Taq, Trawsgrifiad Gwrthdroi, UDG |
PositiveControl | 200 μL tiwb ×1 | Melyn | Pseudovirus o genynnau Targed ac IC |
Rheolaeth Negyddol | 200μL×1tube | Di-liw | ddH2O |
Gweithdrefn Prawf:
A. Paratoi Sampl
RNA wedi'i echdynnu yw'r deunydd cychwynnol ar gyfer pecyn Prawf Acid SARS-CoV-2 Nucleic.
Pwysig: Rhaid i bob gweithdrefn echdynnu asid niwcleig gael ei chyflawni ar yr un pryd ag un rheolydd cadarnhaol (40 μL, gwanhau gydag atebion halwynog di-haint/PBS i'r cyfaint a ddymunir) ac un rheolaeth negyddol (40 μL, wedi'i wanhau gydag atebion halwynog di-haint/PBS i'r cyfaint a ddymunir).
Argymhellir defnyddio'r pecynnau echdynnu asid niwcleig masnachol canlynol: PureLinkTM Viral RNA/DNA Mini Kit (Invitrogen); Pecyn Mini RNA Firaol (QIAGEN); TIANamp Hi-DNA/RNA Kit (TIANGEN);
B. Setup Cymysgedd Ymateb
1. Dylai'r holl adweithyddion a samplau gael eu dadmer yn llwyr, eu cymysgu'n llwyr a'u canoli'n fyr ar dymheredd ystafell (tua 18 i 25 o C) cyn eu defnyddio.
2. Paratowch y cyfaint gofynnol o'r Cymysgedd Ymateb mewn tiwb microcentrifuge polypropylen o faint priodol.
3. Pipette 25 μL o'r Mix Ymateb i bob un sy'n ofynnol yn dda o blât adwaith optegol 96-da priodol neu diwb adwaith optegol priodol.
C. Ychwanegiad templed
1. Ychwanegu 5 μL o RNA wedi'i echdynnu o Samplau/ Rheolaeth gadarnhaol/ Rheolaeth negyddol. Cyfanswm y cyfaint yw 30 μL.
Gosod Ymateb | |
Cymysgedd Ymateb COVID-19 | 23.3 μL |
Cymysgedd COVID-19Enzyme | 1.7 μL |
Samplau neu Reolaethau | 5 μL |
Cyfanswm y Gyfrol | 30μL |
2. Cymysgwch y samplau a'r rheolaethau yn drylwyr gyda'r Cymysgedd Ymateb trwy bibelli i fyny ac i lawr / Vortex.
3. Caewch y plât adwaith 96-da gyda chaeadau priodol neu ffilm gludiog optegol a'r tiwbiau adwaith gyda chaeadau priodol.
4. Canoli'r plât adwaith 96-da mewn canrif gyda rotor plât microdon am 30 eiliad am tua 2500rpm.
D. Rhaglennu'r Offeryn PCR Amser Real
I gael gwybodaeth sylfaenol am sefydlu a rhaglennu'r gwahanol offerynnau PCR amser real, cyfeiriwch at lawlyfr defnyddiwr yr offeryn priodol. Mae'r ymosodiad wedi'i optimeiddio ar gyfer system PCR Amser Real ABI7500. Cyflawnir y rhediad PCR gydag amodau beicio fel y disgrifir yn y tabl isod.
Na. | Llwyfan | Tymheredd | Hyd | Cylchredau | Casglu data |
1 | Gwrthdroi'r adwaith trawsgrifio | 50°C | 10 munud | 1 | / |
2 | Cyn-denaturation | 95°C | 30 sec | 1 | / |
3 | Dnaturation | 95°C | 10 sec | 45 | / |
Cyflwyno ac ymestyn | 58°C | 30 sec | Casgliad fflworideiddio pwynt gorffen |
Diffinio'r synwyryddion fflworideiddio
Targed | Enw'r Synhwyrydd | Gohebydd | Quencher |
RNA penodol COVID-19 | Targedu genyn ORF1ab | FAM | Dim |
TargedU genynnau N | HEX/VIC | Dim | |
TargedU genyn E | ROX | Dim | |
Rheolaeth Fewnol | Genyn ceidwad tŷ | Cy5 | Dim |
*Gosodwch gyfeiriad mewnol fflworideiddio'r offeryn i "Dim", er enghraifft: Ar gyfer offerynnau cyfres ABI, gosodwch "Cyfeirnod Goddefol" i "Dim".
E. Dadansoddi data
Gosodwch y paramedrau dadansoddi a dadansoddi'r data yn unol â chyfarwyddiadau gweithredu'r offerynnau perthnasol.
Cymerwch ABI 7500 fel enghraifft:
Dylid gosod y Llinell Sylfaen i ystod sy'n dileu'r fflworideiddio cefndir a geir yn y cylchoedd cynnar o ymhelaethu, ond nad yw'n gorgyffwrdd â'r ardal lle mae signalau ymhelaethu yn codi uwchlaw'r cefndir (Gwerth dechrau:3 10; Gwerth terfynol: 10-20). Dylai'r Trothwy Beicio (Ct) fod ar waelod y cyfnod esbonyddol. Cliciwch "Dadansoddiad" i gael canlyniad y dadansoddiad yn awtomatig, a darllenwch y canlyniad canfod yn y ffenestr "Adroddiad".
Tagiau poblogaidd: sars - cov-2 cnewyllol asid prawf cit, Tsieina, cyflenwyr, gweithgynhyrchwyr, ffatri, swmp
Anfon ymchwiliad
Fe allech Chi Hoffi Hefyd
